अध्ययन माइलोपेरॉक्सिडेस रंगने से रक्त रोगों का निदान बेहतर होता है

मायेलोपरोक्सीडेज (एमपीओ) स्टेनिंग, जिसे ल्यूकोसाइट पेरोक्सीडेज (पीओएक्स) स्टेनिंग के रूप में भी जाना जाता है, एक व्यापक रूप से इस्तेमाल की जाने वाली साइटोकेमिकल स्टेनिंग विधि है। मुख्य रूप से अस्थि मज्जा कोशिकाओं और रक्त स्मीयरों को धुंधला करने के लिए नियोजित, यह तकनीक विशेष रूप से ल्यूकेमिया वर्गीकरण में हेमटोलोगिक विकारों के निदान में सहायता के लिए इंट्रासेल्युलर पेरोक्सीडेज गतिविधि का पता लगाती है।

एमपीओ स्टेनिंग इंट्रासेल्युलर पेरोक्सीडेज की उत्प्रेरक प्रतिक्रिया पर निर्भर करता है। यह एंजाइम ऑक्सीजन उत्पन्न करने के लिए ऑक्साइड को तोड़ता है, जो फिर पोटेशियम आयोडाइड के साथ प्रतिक्रिया करके आयोडीन बनाता है। आयोडीन राइट-गिम्सा डाई के साथ मिलकर साइटोप्लाज्म में रंगीन कण बनाता है जो माइक्रोस्कोपी के तहत पेरोक्सीडेज वितरण को प्रकट करता है। विभिन्न कोशिका प्रकार अलग-अलग पेरोक्सीडेज सामग्री और वितरण पैटर्न प्रदर्शित करते हैं, जिससे एमपीओ धुंधलापन उनके बीच अंतर कर सकता है।

मानक एमपीओ स्टेनिंग के लिए सटीकता और विश्वसनीयता सुनिश्चित करने के लिए विशेष अभिकर्मक किट की आवश्यकता होती है। एक विशिष्ट किट में शामिल हैं:

• समाधान ए: ईओसिन समाधान- एक अम्लीय डाई जो साइटोप्लाज्म को लाल या गुलाबी रंग में रंग देती है
• समाधान बी: ​​एज़्योर II- एक मूल डाई जो नाभिक को नीला या बैंगनी रंग देती है
• समाधान सी: पोटेशियम आयोडाइड पीबीएस बफर- इसमें पेरोक्सीडेज प्रतिक्रिया सब्सट्रेट होता है और पीएच स्थिरता बनाए रखता है
• समाधान डी: राइट-गिम्सा दाग- एक दोहरे उद्देश्य वाला दाग जो सेलुलर आकारिकी को बढ़ाता है

विभिन्न प्रयोगशाला आवश्यकताओं को समायोजित करने के लिए किट विभिन्न आकारों (5-परीक्षण, 20-परीक्षण और 100-परीक्षण कॉन्फ़िगरेशन) में उपलब्ध हैं।

1. कार्यशील समाधान की तैयारी: घोल सी को घोल डी के साथ मिलाएं (आमतौर पर 1.0ml:250μl अनुपात)। दो घंटे के अंदर प्रयोग करें.
2. धब्बा निर्धारण: तैयार अस्थि मज्जा या रक्त स्मीयर को मेथनॉल या इथेनॉल के साथ 5-10 मिनट के लिए ठीक करें।
3. धुंधलापन: तापमान और आर्द्रता को नियंत्रित करते हुए स्थिर स्मीयरों को 5-10 मिनट के लिए कार्यशील घोल में डुबोएं।
4. rinsing: अतिरिक्त दाग हटाने के लिए आसुत जल या पीबीएस बफर से धीरे से धोएं।
5. पलटवार करना(वैकल्पिक): न्यूक्लियर कंट्रास्ट को बढ़ाने के लिए हेमेटोक्सिलिन का उपयोग करें।
6. सुखाने: हवा में सुखाएं या ब्लो ड्रायर का उपयोग करें।
7. माइक्रोस्कोपी: पेरोक्सीडेज गतिविधि और वितरण का मूल्यांकन करने के लिए दाग वाले धब्बों की जांच करें।

परिणाम व्याख्या के लिए विशेष विशेषज्ञता की आवश्यकता होती है। सामान्य निष्कर्षों में शामिल हैं:

• सकारात्मक प्रतिक्रिया: लाल-भूरे से गहरे नीले रंग के साइटोप्लाज्मिक कणिकाएं (कमजोर बनाम मजबूत सकारात्मकता)। कणिकाएँ संपूर्ण कोशिकाद्रव्य को ढक सकती हैं या केन्द्रक को अस्पष्ट कर सकती हैं।
• नकारात्मक प्रतिक्रिया: कणिकाओं के बिना नीला साइटोप्लाज्म और समान रूप से बैंगनी-लाल नाभिक।
• इयोस्नोफिल्स: गहरा नीला धुंधलापन प्रदर्शित करता है, कभी-कभी बाह्य कोशिकीय सुई जैसे क्रिस्टल के साथ।

• ल्यूकेमिया वर्गीकरण: माइलॉयड (एमपीओ-पॉजिटिव) को लिम्फोइड (एमपीओ-नेगेटिव) ल्यूकेमिया से अलग करता है, उपचार संबंधी निर्णयों का मार्गदर्शन करता है।
• तीव्र माइलॉयड ल्यूकेमिया (एएमएल) निदान: माइलॉयड उत्पत्ति की पुष्टि करता है और विभिन्न एएमएल उपप्रकारों का संकेत देने वाली सकारात्मकता दरों के साथ उपप्रकार में सहायता करता है।
• मायलोइड्सप्लास्टिक सिंड्रोम (एमडीएस) मूल्यांकन: असामान्य एमपीओ पैटर्न एमडीएस का सुझाव देते हुए सेलुलर परिपक्वता और विभेदन का आकलन करता है।
• अन्य रुधिर संबंधी विकार: क्रोनिक माइलॉयड ल्यूकेमिया और मायलोफाइब्रोसिस के निदान में उपयोगी।

• अभिकर्मक गुणवत्ता और भंडारण की स्थिति
• सख्त प्रोटोकॉल का पालन
• उचित स्मीयर तैयारी
• इष्टतम धुंधलापन अवधि
• रोगविज्ञानियों द्वारा विशेषज्ञ सूक्ष्म मूल्यांकन

एमपीओ स्टेनिंग को बढ़ाने के लिए तकनीकी प्रगति जारी है। इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री अब अधिक सटीकता के लिए एमपीओ को प्रतिरक्षा मार्करों के साथ जोड़ती है, जबकि फ्लो साइटोमेट्री मात्रात्मक एमपीओ का पता लगाने में सक्षम बनाती है। जैसे-जैसे यह क्लासिक साइटोकेमिकल विधि विकसित होती है, यह हेमटोलोगिक निदान और उपचार में और भी अधिक योगदान देने का वादा करती है।